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技術(shù)文章
選擇性氨基酸混合物(Dropout Supplement)

酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基之:

 選擇性氨基酸混合物(Dropout Supplement, DO Supplement

(單缺,雙缺,三缺,四缺)

 

背景描述:

酵母菌的質(zhì)粒篩選通常基于營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌株的使用而開(kāi)展,這些菌株在缺乏某種特定培養(yǎng)基組分(比如氨基酸,嘌呤或嘧啶)的情況下無(wú)法生長(zhǎng)。當(dāng)轉(zhuǎn)化含有突變基因的質(zhì)粒后使得陽(yáng)性轉(zhuǎn)化克隆能夠在缺乏必需營(yíng)養(yǎng)組分的培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),正因如此,省卻成分培養(yǎng)基添加劑/選擇性氨基酸混合物(DO medium supplements)能用來(lái)篩選成功轉(zhuǎn)化的酵母培養(yǎng)物。

 

選擇性氨基酸混合物/氨基酸缺失混合物(DO medium supplements)同義名:

Yeast Media, Amino Acid Dropout Mixes

Yeast Synthetic Drop-out Medium Supplements

Complete Supplement Mixture (CSM)

Amino Acid Supplement (Drop-Out Mixture)

 

酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基:

酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基(Synthetic Dropout Media, SD Media)多用來(lái)營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記基因的篩選和酵母轉(zhuǎn)化。這類培養(yǎng)基的配制根據(jù)商業(yè)化產(chǎn)品的區(qū)別有兩種方式。

*種方式:無(wú)氨基酸酵母氮源基礎(chǔ)+葡萄糖+選擇性氨基酸混合物(YNB without amino acids + glucose+ DO Supplement

第二種方式:酵母基本培養(yǎng)基SD Base+選擇性氨基酸混合物(Yeast Minimal Base——SD Base + DO Supplement

  1. 商業(yè)化SD BaseYNB的差別在于前者已添加葡萄糖。
  2. 有研究顯示,葡萄糖與氨基酸一起高壓滅菌會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),培養(yǎng)基會(huì)變色,由淺黃到深褐色不等,可能對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生一些影響,但一般情況下不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)。因此,很多實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或通過(guò)對(duì)自身實(shí)驗(yàn)體系的評(píng)估,還是傾向用【第二種方式】來(lái)配制選擇性缺陷*培養(yǎng)基。
  3. 我司(懋康生物)建議客戶根據(jù)自身需求來(lái)選擇產(chǎn)品和配制培養(yǎng)基。

 

酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基工作原理:

特異的酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基用于選擇培養(yǎng)含特異載體的酵母或雜交篩選。其工作原理如下(以基于Matchmarker GAL4-based two hybrid assay系統(tǒng)用到的載體為例):

誘餌載體(pGBKT7-Bait)含合成色氨酸(Trp)的基因,誘捕載體(pGADT7-Prey)含合成亮氨酸(Leu)的基因。前者的親代酵母菌株(如Y2HGold)本身不含Trp基因,在Trp缺失的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)。當(dāng)誘餌載體(pGBKT7-Bait)成功轉(zhuǎn)入Y2HGold,其在Trp缺失的培養(yǎng)基【即SD-Trp單缺培養(yǎng)基】上就能正常生長(zhǎng)。同理,后者的親代酵母菌株(如Y187)本身不含Leu基因,在Leu缺失的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)。但當(dāng)誘捕載體(pGADT7-Prey)成功轉(zhuǎn)入Y187,其在Leu缺失的培養(yǎng)基【即SD-Leu單缺培養(yǎng)基】上能正常生長(zhǎng)。

 

選擇性氨基酸混合物(DO medium supplements)類別和應(yīng)用:

不管是*種方式還是第二種方式配制的酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基(SD Media)配制的關(guān)鍵在于選擇合適的選擇性/缺陷型氨基酸混合物(DO supplement)來(lái)配制特定的培養(yǎng)基,從而滿足特定的需求。如何選擇合適的選擇性氨基酸混合物,見(jiàn)表1

根據(jù)氨基酸缺失數(shù)目分為單缺氨基酸混合物(Single Dropout Supplements,SDO),雙缺氨基酸混合物(Double  Dropout Supplements,DDO),以此類推。

 

主要應(yīng)用:

  1. 營(yíng)養(yǎng)缺陷型表型的確認(rèn)
  2. 酵母轉(zhuǎn)化陽(yáng)性菌株的篩選
  3. 酵母雙雜交篩選
  4. 酵母單雜交選擇

1. 選擇性氨基酸混合物(DO medium supplements)類別和應(yīng)用

類型

應(yīng)用

名稱

MKbio編號(hào)

Clontech編號(hào)

SDOSingle Dropout Supplements)(單缺)

外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

DO Supplement -His

MS6316-10G

630415

DO Supplement -Leu

MS6317-10G

630414

DO Supplement -Trp

MS6318-10G

630413

DO Supplement -Ura

MS6319-10G

630416

DDODouble  Dropout Supplements

配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物(雙缺)

外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化免疫共沉淀、Y187AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)、接合型二倍體篩選

DO Supplement -His/-Leu

MS6320-10G

630418

DO Supplement -His/-Ura

MS6321-10G

630422

DO Supplement -Leu/-Trp

MS6322-10G

630417

DO Supplement -Met/-Trp

MS6323-10G

630431

DO Supplement -Trp/-Ura

MS6324-10G

630427

DO Supplement -Trp/-His

MS6325-10G

/

DO Supplement -Ura/-Leu

MS6326-10G

/

TDOTriple  Dropout Supplements

配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物(三缺)

外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)報(bào)告基因檢測(cè)、Y187AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào)告基因分析(His3,Ade2

DO Supplement -His/-Leu/-Trp

MS6331-10G

630419

DO Supplement -His/-Leu/-Ura

MS6332-10G

630423

DO Supplement -His/-Trp/-Ura

MS6333-10G

630424

DO Supplement -Leu/-Met/-Trp

MS6334-10G

630430

DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura

MS6335-10G

630426

QDOQuadruple Dropout Supplements

配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物(四缺)

酵母雙雜交系統(tǒng)和酵母三雜交系統(tǒng)報(bào)告基因檢測(cè)、Y187AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào)告基因分析(His3,Ade2

DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp

MS6341-10G

630428

DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp

MS6342-10G

630429

DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura

MS6343-10G

630425

 

選擇性氨基酸混合物(DO medium supplements)訂購(gòu)信息:現(xiàn)貨供應(yīng),性價(jià)比高,。

品牌

名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

對(duì)應(yīng)Clontech

MKbio

DO Supplement -His

MS6316-10G

10g

418

630415

MKbio

DO Supplement -Leu

MS6317-10G

10g

418

630414

MKbio

DO Supplement -Trp

MS6318-10G

10g

418

630413

MKbio

DO Supplement -Ura

MS6319-10G

10g

418

630416

MKbio

DO Supplement -His/-Leu

MS6320-10G

10g

418

630418

MKbio

DO Supplement -His/-Ura

MS6321-10G

10g

418

630422

MKbio

DO Supplement -Leu/-Trp

MS6322-10G

10g

418

630417

MKbio

DO Supplement -Met/-Trp

MS6323-10G

10g

418

630431

MKbio

DO Supplement -Trp/-Ura

MS6324-10G

10g

418

630427

MKbio

DO Supplement -Trp/-His

MS6325-10G

10g

418

/

MKbio

DO Supplement -Ura/-Leu

MS6326-10G

10g

418

/

MKbio

DO Supplement -His/-Leu/-Trp

MS6331-10G

10g

418

630419

MKbio

DO Supplement -His/-Leu/-Ura

MS6332-10G

10g

418

630423

MKbio

DO Supplement -His/-Trp/-Ura

MS6333-10G

10g

418

630424

MKbio

DO Supplement -Leu/-Met/-Trp

MS6334-10G

10g

418

630430

MKbio

DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura

MS6335-10G

10g

418

630426

MKbio

DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp

MS6341-10G

10g

418

630428

MKbio

DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp

MS6342-10G

10g

418

630429

MKbio

DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura

MS6343-10G

10g

418

630425

【重要消息】:

  1. 見(jiàn)我司(懋康生物)整理的酵母雙雜交(Yeast two-hybrid assays)產(chǎn)品專題,從酵母菌株、酵母質(zhì)粒、酵母培養(yǎng)基到篩選標(biāo)志(抗生素),。
  2. 見(jiàn)我司(懋康生物)的酵母雙雜交系列產(chǎn)品*活動(dòng),屬于你的福利,當(dāng)然要享受起來(lái)。。
  3. 見(jiàn)我司(懋康生物)整理的無(wú)氨基酸酵母氮源基礎(chǔ)(BD DifcoYNB without amino acids)產(chǎn)品信息,。

 

相關(guān)產(chǎn)品:產(chǎn)品具體信息。

品牌

名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

對(duì)應(yīng)Clontech

MKbio

YPD Agar Medium

MS6301-350G

350g

550

630410

MKbio

YPD Medium

MS6302-250G

250g

438

630409

MKbio

YPDA Agar Medium

MS6303-350G

350g

550

630465

MKbio

YPDA Medium

MS6304-250G

250g

438

630464

MKbio

YNB Without Amino Acids

MS6305-100G

100g

330

291940Difco

MKbio

YNB Without Amino Acids

MS6305-500G

500g

1450

291940Difco

MKbio

Minimal SD Agar Base

MS6311-467G

467g

1428

630412

MKbio

Minimal SD Base

MS6312-267G

267g

768

630411

MKbio

Minimal SD Agar Base Gal/Raf

MS6313-270G

270g

1428

630421

MKbio

Minimal SD Base Gal/Raf

MS6314-185G

185g

988

630420

【特別提醒】:

  1. 我司(懋康生物)可根據(jù)需求定制只符合您的缺陷型氨基酸混合物,有求并有應(yīng),詳情。
  2. 我司(懋康生物)提供預(yù)混好的酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷完整培養(yǎng)基系列凍干粉,使用更加簡(jiǎn)單快捷,詳情。

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供產(chǎn)品。

 

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